海馬各區(qū)含有大量的乙酞膽堿酷酶(AChE)陽性終末，主要來源于基底前腦的膽堿能神經(jīng)元。AD患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)有廣泛的神經(jīng)病理學(xué)改變，其中以基底前腦膽堿能神經(jīng)元損害占主要地位[m。學(xué)習(xí)記憶、認(rèn)知行為的改善程度與海馬膽堿能纖維網(wǎng)的密度密切相關(guān)Czl。近來研究表明人參皂貳( GS)處1可明顯改善淀粉樣膚所致小鼠被動(dòng)回避，能夠改變AChE活性[al，并且認(rèn)為其對(duì)膽堿能系統(tǒng)的影響可能是人參皂貳Rgl的重要作用機(jī)制之一。本研究擬探討人參皂貳對(duì)老齡大鼠海馬結(jié)構(gòu)膽堿能纖維改變的影響，為人參皂貳抗腦衰老及改善老年動(dòng)物膽堿能系統(tǒng)認(rèn)知能力提供可靠的酶細(xì)胞化學(xué)基礎(chǔ)。

1材料和方法

1. 1實(shí)臉動(dòng)物及分組選用相同環(huán)境下飼養(yǎng)的SPF級(jí)(中國醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部SCXK[遼〕2003-0009) Wistar雌性大鼠24只，隨機(jī)分為3組(n=8)，青年組(3-r5月齡)、老齡組(27月齡)，老齡給藥組(從第17個(gè)月始飼以人參皂貳至27個(gè)月齡)。給藥方法:按照25 mg·掩一’·d-’的劑量[47將人參皂貳溶人水中，動(dòng)物隨日常飲水而自行服用(人參皂貳購自吉林省集安萬泰中藥廠，純度為81寫，主要成分為;Re: 21. 2 0 o .Rgl:10.000、Rbl:2.700、Rg2 : 3. 7 0 o、Rg3 : 2. 4 0 o、Rd:10.9%)。

1. 2 AChE酶細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本制備動(dòng)物在10%水合抓醛(( 3. 5 ml/噸)腹腔麻醉下，經(jīng)左心室主動(dòng)脈插管灌注0. 9 % NaCI 150 ml, 4%多聚甲醛350 ml固定后取腦，4h后人30 0 o Holt溶液內(nèi)，翌日待腦組織塊下沉后，OC'I'包埋，-22℃恒冷箱切片機(jī)將腦組織切成額狀20 }m厚連續(xù)切片。

1. 3 AChE酶細(xì)胞化學(xué)染色程序按照陳嘯梅[s7并經(jīng)我們改進(jìn)后的方法進(jìn)行AChE酶細(xì)胞化學(xué)染色。切片浸人雙蒸水后，置人作用液(堿化乙酞硫膽堿5 mg.0. 06 mol/L醋酸鈉6. 32 m1,0. 1 mol/L醋酸0. 2 m1,0. 1 mol/L檸檬酸鈉0. 48 ml, 30 rnmol/L硫酸銅1 m1,4 rnmol/L異-OMPA 0. 2 ml, 5 ml鐵氛化鉀1 ml,蒸餾水0. 8 ml, pHS. 5-r 5. 6) 37℃恒溫箱中孵育2h。然后脫水、透明、中性樹膠封片。鏡下觀察可見棕黃色的AChE陽性纖維及終扣。

1. 4顯微圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用MetaMorph/DP10/BX 41圖像分析系統(tǒng)對(duì)AChE染色切片進(jìn)行分析和處理。各組每例隨機(jī)取4張切片，高倍鏡下測定各組的CAl } CA3區(qū)、齒狀回膽堿能纖維的密度(IOD=積分光密度值)。采用EXCEL 2000統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和處理，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)和AVONA分析。

2結(jié)果

海馬結(jié)構(gòu)的CA3區(qū)、CAl區(qū)、齒狀回、下托和海馬傘內(nèi)均含有豐富的AChE陽性纖維。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)觀察與學(xué)習(xí)記憶及老化密切相關(guān)的CA3 , CAl區(qū)和齒狀回。鏡下可見青年組海馬CA3 , CAl區(qū)錐體細(xì)胞層棕黃色的膽堿能纖維非常密集，粗細(xì)均勻且交織成網(wǎng)。海馬腔隙分子層內(nèi)縱行纖維較長并形成串珠狀，末端可見終扣(圖1A, 2A)。齒狀回的纖維在顆粒細(xì)胞層靠近分子層和多型細(xì)胞層處較為密集，著色亦很深(圖 3A)。老齡組CA3區(qū)膽堿能纖維缺失明顯，特別是錐體細(xì)胞層最為嚴(yán)重，纖維萎縮變細(xì)、斷裂，串珠狀纖維及終扣減少，但輻射層縱行纖維不明顯且纖維橫向分支少，稀疏纖維隨處可見。并且纖維顏色亦變淡(圖1B)。老年組CA1區(qū)錐體細(xì)胞層纖維變細(xì)，排列紊亂，顏色變淡且纖維網(wǎng)密度也降低，輻射層縱行纖維不明顯且纖維橫向分支少，末端終扣較少。有些纖維雖有串珠狀特征，但很短(圖2B)o

32人拳皂貳對(duì)老路大筑海馬結(jié)構(gòu)膽械能扦雄的影響

人參皂貳明顯改善饑體的某些衰老癥狀，其適應(yīng)原樣作用，突進(jìn)蛋白質(zhì)代謝和改變霉活性的作用倍受關(guān)注人參皂貳通過促進(jìn)乙院膽堿釋放.增加坤經(jīng)未梢攝取Rb1,rb2對(duì)神經(jīng)元具有保護(hù)及營養(yǎng)作用，并可促進(jìn)神經(jīng)元突起再生，增強(qiáng)神經(jīng)元抗損傷與凋亡的能力Cal。本研究給藥組海馬結(jié)構(gòu)膽堿能纖維的各種改變有所減輕，CA3,CA1及齒狀回3個(gè)亞區(qū)膽堿能纖維的密度均值比老齡組分別增加了31.2%,76.500和116. 8 0 o。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了人參皂貳不僅使損傷的海馬結(jié)構(gòu)膽堿能神經(jīng)纖維開始側(cè)枝出芽或者再生的軸突開始延伸，而且可使二者重新獲得膽堿能纖維的支配。新近研究報(bào)道Csl丹參酮連續(xù)灌胃14d，觀察到AI〕大鼠海馬各亞區(qū)膽堿能纖維面積百分比顯著低于對(duì)照組。我們?cè)诶淆g前期給予人參皂貳低劑量10個(gè)月，在整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能恢復(fù)過程中逐漸、持續(xù)的發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用。婁愛林[}o」證明人參皂貳可促進(jìn)海馬CAl , CA3區(qū)苔鮮纖維末端的發(fā)芽，并可使齒狀回顆粒細(xì)胞長時(shí)程增強(qiáng)的持續(xù)時(shí)間延長，從而提高大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，但尚缺少量化指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)證明了學(xué)習(xí)記憶行為的改善程度可能與海馬膽堿能纖維網(wǎng)的密度密切相關(guān)。人參皂貳提高老齡大鼠膽堿能纖維密度的能力，可能也與膽堿能系統(tǒng)相關(guān)介質(zhì)酶活性等的恢復(fù)密切相關(guān)。